velikol.ru
1

Занятие 16


Лабораторная работа. Определение концентрации липопротеидов высокой и низкой плотности в сыворотке (плазме) крови.


Принцип метода. Хиломикроны, липопротеиды очень низкой плотности (VLDL) и липопротеиды низкой плотности (LDL) осаждаются при добавлении к образцу фосфорновольфрамовой кислоты и Мg2+. После центрифугирования в супернатанте остаются только липоротеиды высокой плотности (НDL).


Ход работы.

Реагенты

Опытная проба, мл

Стандартная проба, мл

Сыворотка (плазма)

0,15

-

Осаждающий реагент

0,3

0,3

Стандартный раствор

-

0,15

Хорошо перемешать и оставить на 10 мин. при комнатной температуре. Опытную пробу отцентрифугировать в течение 10 мин. при 4 000 об./мин. Прозрачный супернатант используют для определения концентрации НDL. Определить холестерин в опытной и стандартной пробах в течение часа.

Реагенты

Опытная проба,

мл

Стандартная проба,

мл

Супернатант

0,2

-

Рабочий реагент

2,0

2,0

Стандартный раствор + осаждающий реагент

-

0,2

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре (18-250С) и измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против дистиллированной воды в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5мм при длине волны 490нм. Окраска стабильна не менее 2 часов после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

Примечание. Для анализа использовать только прозрачный супернатант. В случае мутного супернатанта (неполное осаждение) или при содержании триглицеридов в пробе более 4,0 ммоль/л следует провести повторное осаждение, увеличив объём осаждающего реагента в 2 раза. Полученный результат умножить на 2.


Расчёт концентрации (С) холестерина НDL проводят по формуле:


С = Еоп.ст. • 1,29 (ммоль/л)

или

С = Еоп.ст. • 50 (мг/100мл)


где Еоп.экстинкция опытной пробы,

Ест.экстинкция стандартной пробы,


Расчёт концентрации (С) LDL проводят по формуле:


С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/5] мг/100 мл

или

С = [общий холестерин] – [НDLхолестерин] – [триглицериды/2,2] ммоль/л



Норма. НDL

Мужчины Женщины

Нормальные величины: > 55 мг/100мл > 65 мг/100мл

(1,42ммоль/л) (1,68ммоль/л)

Группа риска: 35-55 мг/100мл 45-65 мг/100мл

(0,9-1,42ммоль/л) (1,16-1,68ммоль/л)

Патологическое нарушение липидного обмена:

<35 мг/100мл <45 мг/100мл

(0,9ммоль/л) (1,16ммоль/л)

LDL


Группа риска: ≥150 мг/100мл ≥190 мг/100мл

(3,9ммоль/л) (4,9 ммоль/л)


Клинико-диагностическое значение.